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我們常說過柱子其實(shí)就是柱層析分離,也叫柱色譜,1903年由俄羅斯科學(xué)家第一次發(fā)明使用,其把植物色素的溶液經(jīng)過粉碎的碳酸鈣粉末,發(fā)現(xiàn)從上到下在碳酸鈣粉末上有不同的色帶,通過對(duì)不同色帶的分開提取,得到了較純?nèi)~綠素,葉黃素等。
該方法經(jīng)過經(jīng)過百年的發(fā)展至今已經(jīng)比較成熟,固定相也從單一的碳酸鈣粉末發(fā)展到了氧化鋁(又分為酸性、中性、堿性),硅膠,活性炭等,其中各大實(shí)驗(yàn)室常用的便是硅膠,一般分為正相硅膠和反相硅膠!
固定相(硅膠)一般要經(jīng)過純化和活性處理,顆粒大小應(yīng)當(dāng)均勻統(tǒng)一,理論上其顆粒越小、同單位質(zhì)量表面積越大,吸附能力就越高,分離效果也就越好。但是實(shí)際使用中固定相的顆粒太小時(shí)往往會(huì)存在兩個(gè)情況,一個(gè)是其質(zhì)更輕,容易飄散在空氣中(硅膠進(jìn)入人體無法降解,越細(xì)越毒);二是顆粒小也會(huì)導(dǎo)致顆粒之間縫隙小,從而使溶劑的流速就太慢,耗時(shí);以硅膠為例,目前已經(jīng)商業(yè)化用量最大的硅膠尺寸為200-300目。
過柱手段這塊,除了前面說的正向循環(huán)制備,高效液相制備,過柱機(jī)這些自動(dòng)分析的設(shè)備,手動(dòng)過柱方面主要分為常壓過柱,減壓過柱,加壓過柱三種。
其中減壓過柱,因?yàn)橄疵搫┝魉龠^快,會(huì)損失大半部分塔板數(shù),分離效果較差,適合分離TLC板子分的比較開的樣品,尤其適合產(chǎn)物只有一個(gè)大極性雜質(zhì)的樣品;所有其大多數(shù)時(shí)間被用于化合物的預(yù)處理,過掉部分雜質(zhì)后再仔細(xì)純化。要注意的是,使用過程中因?yàn)樨?fù)壓帶來的溶劑揮發(fā),會(huì)導(dǎo)致柱子外表面大量水珠凝結(jié),對(duì)水敏感的化合物不要輕易嘗試。
常壓過柱是三者中分離效果更好的一種過柱方式,但是因?yàn)楹芏鄷r(shí)候溶劑走的太慢,分離效果再好也會(huì)影響效率,所以這時(shí)候一般會(huì)給與壓力,這就是所謂加壓過柱;但這個(gè)壓力不宜過高,一般手動(dòng)的用雙鏈球,自動(dòng)的就用個(gè)養(yǎng)魚泵,兩者都可以改裝一下。
(內(nèi)容來源:有機(jī)大菜仔)
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